ชุดทดสอบ TB-IGRA ELISA

1. หลักการ

TB-IGRA เป็นการทดสอบในหลอดทดลองที่ตรวจจับการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันแบบอาศัยเซลล์ต่อเชื้อวัณโรค (MTB) โดยการวัดปริมาณอินเตอร์เฟอรอน-แกมมา (IFN-γ) ที่ปล่อยออกมาจากเซลล์ T ที่ไวต่อสิ่งกระตุ้นเมื่อถูกกระตุ้นด้วยแอนติเจนจำเพาะของ MTB (เช่น ESAT-6, CFP-10 และ TB7.7)

2. คุณสมบัติหลัก

• ความจำเพาะสูง:

  • ใช้แอนติเจนจำเพาะของ MTB (ไม่มีใน BCG และเชื้อไมโคแบคทีเรียที่ไม่ใช่วัณโรคส่วนใหญ่) ลดการเกิดผลบวกลวง

• ความไวสูง:

  • ตรวจจับทั้งวัณโรคระยะแสดงอาการและวัณโรคแฝง (LTBI) ได้อย่างแม่นยำกว่าการทดสอบผิวหนังทูเบอร์คูลิน (TST)

• ผลลัพธ์เชิงปริมาณ/เชิงคุณภาพ:

  • ผลลัพธ์แตกต่างกันไปตามแพลตฟอร์ม (เช่น จำนวนจุดในการทดสอบ ELISPOT หรือความเข้มข้นของ IFN-γ ใน ELISA)

• การดำเนินการที่รวดเร็ว: โดยทั่วไปผลลัพธ์จะพร้อมใช้งานภายใน24–48 ชั่วโมง.

3. ข้อกำหนดตัวอย่าง

• ชนิดตัวอย่าง: เลือดครบส่วนจากหลอดเลือดดำ (ใส่สารกันเลือดแข็งเฮพาริน)

• ปริมาณ: โดยปกติ1–3 มล. ต่อการทดสอบหนึ่งครั้ง (แตกต่างกันไปตามผู้ผลิตชุดทดสอบ)

• การเก็บรักษา: ดำเนินการภายใน8–32 ชั่วโมง (ขึ้นอยู่กับข้อกำหนดของชุดทดสอบ)

4. ขั้นตอนการทดสอบ

1. การกระตุ้น: บ่มเลือดกับแอนติเจน MTB และสารควบคุม (สารควบคุมลบ/สารควบคุมไมโทเจน)

2. การตรวจจับ IFN-γ:

   • แบบ ELISPOT (เช่น T-SPOT.TB): นับเซลล์ T ที่หลั่ง IFN-γ เป็นจุด

   • แบบ ELISA (เช่น QuantiFERON-TB Gold): วัดความเข้มข้นของ IFN-γ ผ่านการทดสอบอิมมูโน

3. การแปลผล:

   • เปรียบเทียบผลลัพธ์กับค่าตัด (แตกต่างกันไปตามการทดสอบ)

   • ผลลัพธ์ที่ไม่แน่นอนอาจต้องทำการทดสอบซ้ำ

5. ตัวชี้วัดประสิทธิภาพ

• ความไว: >90% สำหรับวัณโรคระยะแสดงอาการ, ~80% สำหรับ LTBI

• ความจำเพาะ: >95% (ไม่ได้รับผลกระทบจากการฉีดวัคซีน BCG)

• ปฏิกิริยาข้าม: น้อยที่สุดกับเชื้อไมโคแบคทีเรียที่ไม่ใช่วัณโรค (NTM)

6. ข้อบ่งชี้

• การคัดกรอง LTBI ในกลุ่มเสี่ยงสูง (เช่น ผู้ป่วย HIV+, ผู้ป่วยที่มีภาวะภูมิคุ้มกันบกพร่อง, ผู้ใกล้ชิด)

• การทดสอบเพิ่มเติมสำหรับการวินิจฉัยวัณโรคระยะแสดงอาการ (ต้องสัมพันธ์กับอาการทางคลินิกและการทดสอบอื่นๆ)

7. ข้อดีกว่า TST

• ไม่มีปฏิกิริยาข้ามกับ BCG

• การทดสอบครั้งเดียว (ไม่ต้องกลับมาอ่านผล)

• ผลลัพธ์เชิงวัตถุวิสัย, อิงห้องปฏิบัติการ

8. ข้อจำกัด

• ไม่สามารถแยกแยะวัณโรคระยะแสดงอาการจาก LTBI ได้

• ต้องใช้อุปกรณ์ห้องปฏิบัติการพิเศษ

• มีค่าใช้จ่ายสูงกว่า TST

• อาจเกิดผลลบลวงในผู้ป่วยที่มีภาวะภูมิคุ้มกันบกพร่อง

9. ชุดทดสอบที่เข้ากันได้ (ตัวอย่าง)

• T-SPOT.TB (Oxford Immunotec): แบบ ELISPOT

• QuantiFERON-TB Gold Plus (Qiagen): แบบ ELISA

10. สถานะการกำกับดูแล

• ได้รับการอนุมัติจาก FDA/CE/WHO สำหรับการคัดกรองการติดเชื้อวัณโรค

การวินิจฉัยในหลอดทดลอง

ใช้สำหรับเท่านั้น

ชุดทดสอบนี้มีน้ำยาเพียงพอสำหรับการทดสอบตัวอย่างสูงสุด 28 ตัวอย่างในการทดสอบหนึ่งครั้ง ส่วนประกอบการกระตุ้น:

1. สารควบคุมลบ (ฝาสีเทา)

2. แอนติเจน TB, ทำให้แห้ง (ฝาสีม่วง)

3. สารเจือจางแอนติเจน TB (ฝาสีม่วง)

4. สารควบคุมบวก (ฝาสีแดง) 28 การทดสอบ 28 การทดสอบ 0.9 มล. 28 การทดสอบ

ส่วนประกอบ ELISA

1. แถบไมโครเพลท

2. มาตรฐาน Human IFN-γ, ทำให้แห้ง (ฝาสีน้ำเงิน)

3. สารเจือจาง

4. แอนติบอดีติดฉลากไบโอติน (ฝาสีเหลือง) 12x 8 หลุม 2 x ขวด 1 x 40 มล. 1 x 6 มล.

5. เอนไซม์คอนจูเกต 100X เข้มข้น (ขวดสีน้ำตาล) 1 x 130μL

6. บัฟเฟอร์ล้าง 10X เข้มข้น 1 x 40 มล.

7. สารละลายโครโมเจน A

8. สารละลายโครโมเจน B

9. สารละลายหยุดปฏิกิริยา 1 x 6 มล. 1 x 6 มล. 1 x 6 มล.

หลักการของการทดสอบ