Human Anti HIV 1 & 2 Elisa ชุดทดสอบสำหรับไวรัสภูมิคุ้มกันบกพร่องของมนุษย์

3. ขั้นตอนการทดสอบ

• ปล่อยให้ส่วนประกอบทั้งหมดมีอุณหภูมิห้องก่อนใช้งานน้ำยาล้างบัฟเฟอร์เข้มข้น 1:20 เจือจางด้วย ddH2O
• ตั้งค่าการควบคุมเชิงบวกสองรายการและการควบคุมเชิงลบสามรายการจ่ายสารควบคุมเชิงบวก 100 ไมโครลิตร (เอชไอวี-1 และเอชไอวี-2) รวมทั้งการควบคุมเชิงลบในบ่อตามลำดับโดยไม่ต้องเจือจางตัวอย่างตั้งค่าว่างหนึ่งหลุมเป็นตัวควบคุมพื้นหลังโดยไม่ต้องเติมของเหลวใดๆเติมสารเจือจางตัวอย่าง 50μl ลงในหลุมทดสอบแต่ละหลุม เติมเซรั่มหรือพลาสมาทดสอบ 50 μl ลงในหลุมทดสอบ ผสมให้เข้ากัน
• วางแผ่นไมโครไทเทอร์ลงในกล่องที่มีความชื้นและฟักที่อุณหภูมิ 37°C เป็นเวลา 30 นาที
• ทิ้งสารละลายปฏิกิริยาและเพิ่มบัฟเฟอร์ล้างเจือจาง 350μl ลงในแต่ละหลุมทิ้งบัฟเฟอร์การซักหลังจากแช่ไว้ 15-30 วินาทีทำซ้ำขั้นตอนการล้าง 5 ครั้ง จากนั้นพลิกจานอย่างแรงเพื่อเอาน้ำออกทั้งหมดและปิดกั้นขอบบ่อบนกระดาษซับน้ำเป็นเวลาสองสามวินาที
• เพิ่ม 100μl ของ Enzyme Conjugate ในแต่ละหลุมผสมเบา ๆ โดยหมุนแผ่นไมโครไทเทอร์บนแท่นแบนเป็นเวลา 1 นาทีห้ามเติม Enzyme Conjugate ลงในช่องว่างด้วย..
• วางแผ่นไมโครไทเทอร์ลงในกล่องที่มีความชื้นและฟักที่อุณหภูมิ 37°C เป็นเวลา 30 นาที
• ล้างแต่ละหลุม 5 ครั้งโดยเติมแต่ละหลุมด้วยบัฟเฟอร์ล้าง 1X เจือจาง จากนั้นพลิกจานอย่างแรงเพื่อเอาน้ำออกทั้งหมดและปิดกั้นขอบของบ่อน้ำบนกระดาษดูดซับเป็นเวลาสองสามวินาที
• เพิ่ม50μlของ Substrate Solution A (สารตั้งต้น HRP) ในแต่ละหลุม จากนั้นเพิ่ม50μlของ Substrate Solution B (TMB) ในแต่ละหลุมผสมเบา ๆ และฟักที่อุณหภูมิ 37°C เป็นเวลา 15 นาที
• เติม Stop Solution หนึ่งหยด (50μl) ลงในแต่ละหลุมเพื่อหยุดปฏิกิริยาของสี
• อ่านค่า OD ที่ 450 นาโนเมตร/630 นาโนเมตรด้วยเครื่องอ่านแผ่นกรองคู่เป็นตัวเลือกในการอ่านค่า OD ที่ 450 นาโนเมตรด้วยเครื่องอ่านแผ่นกรองเดี่ยว(ใช้ค่า OD ของหลุมว่างเพื่อแก้ไขการอ่านค่า OD ทั้งหมดจากหลุมทั้งหมด