แอนติบอดีต่อไวรัสเชื้อตับอักเสบ B แอนติเจนหลัก (HBcAb)

ELISA TestKมัน

สําหรับการวินิจฉัยใน vitro และการใช้งานอาชีพเท่านั้น

ชื่อสินค้า

ชุดทดสอบ ELISA แอนติ HBc (กรด/พลาสมา)

การใช้

ชุดทดสอบ ELISA anti-HBc นี้เป็นการตรวจหาคุณภาพของแอนติบอดีต่ออานติเจนแกนของไวรัสตับอักเสบ B (HBcAb) ในเซรม / พลาสมาของมนุษย์สารปฏิกิริยาเหมาะสําหรับการตรวจคลินิกและการวินิจฉัยการติดเชื้อไวรัสตับอักเสบ B ในเซรัส / พลาสมาของมนุษย์.

หลักการทดสอบ

ไวรัสตับอักเสบ B (HBV) เป็นซองไวรัส DNA แผ่นสองที่อยู่ในตระกูล Hepadnaviridae และถูกยอมรับว่าเป็นสาเหตุหลักของโรคตับอักเสบติดต่อเลือด พร้อมกับไวรัสตับอักเสบ C (HCV)การติดเชื้อ HBV ส่งผลให้เกิดอาการทางคลินิกหลายประเภท ตั้งแต่อาการเบาๆ ที่ไม่ชัดเจน ถึงโรคตับอักเสบรุนแรงซึ่งในบางกรณีอาจนําไปสู่โรคกระจกและมะเร็งตับการจัดหมวดหมู่การติดเชื้อไวรัสตับอักเสบแบบ B ต้องการการระบุเครื่องหมายเชื้อรังหลายอย่างที่แสดงออกในช่วง 3 ขั้นตอน (ระยะอุปสรรค, ระยะรุนแรงและระยะรักษา) ของการติดเชื้อ

ส่วนประกอบหลักของไวรัสคือ แอนติเจนแกนเบื้องต้นของโรคตับอักเสบ B (HBcAg)แอนติเจนแกนนี้ประกอบด้วยโพลีเพปติดตัวเดียวประมาณ 17kD ซึ่งถูกปล่อยเมื่ออนุภาคแกนถูกแยกแยกอย่างน้อยมีตัวกําหนดทางภูมิคุ้มกัน 1 ตัวในแอนติเจน

ไม่นานหลังจากการเริ่มต้นของ HBsAg แอนติบอดีต่อ HBcAg (แอนติบอดีรวมและ IgM ต่อ HBc) ปรากฏขึ้นและไม่เคยหายไปa การติดเชื้อโรคตับอักเสบ B สามารถติดเชื้อได้โดยไม่ต้องใช้ยาต้าน HBc ที่สามารถตรวจพบได้ทางภูมิคุ้มกัน. ปกติพบในผู้ป่วยที่ป่วยด้วยโรคภูมิคุ้มกัน. การสกรีนสําหรับแอนติ-HBc ส่งข้อมูลเกี่ยวกับการแพร่ระบาดของโรคตับอักเสบ B ในประชากรที่แตกต่างกันโรคเรื้อรังการระบุแอนติ-HBc เป็นสิ่งสําคัญเมื่อมีการวินิจฉัยในสถานการณ์ทางคลินิกเครื่องหมาย anti-HBc ทําให้การวินิจฉัยถูกต้อง และการติดตามการพัฒนาของไวรัสได้อย่างเหมาะสมกลิ่นต้าน HBc อาจเป็นตัวชี้แจงเดียวของการติดเชื้อไวรัสตับอักเสบ B (รวมถึงการทดสอบอื่นๆ ของผู้ป่วย HBsAg ลบ)

ระบบการทดสอบ HBcAb ELISA ถูกสร้างขึ้นจากหลักการการแข่งขันในระยะแข็ง, การฝังใน 1 ขั้นตอนมันแข่งขันกับ monoklonal anti-HBc conjugated to horseradish peroxidase (HRP-Conjugate) สําหรับปริมาณที่กําหนดไว้ของ HBcAg ที่สะอาดและเคลือบในไมโครเพลตหากไม่มี anti-HBc ที่มีอยู่ anti-HBc ที่เชื่อมต่อ HRP จะถูกผูกพันกับแอนติเจนภายในบ่อนน้ํา ในระหว่างการล้าง HRP-Conjugate ที่ไม่เชื่อมโยงกันจะถอนออกหลังจากสารละลายโครโมเจน A และ B ถูกเพิ่มเข้าไปในบ่อน้ําและระหว่างการอ่อน, ผลิตภัณฑ์สีน้ําเงินปรากฏ. หลังจากปฏิกิริยาถูกหยุดด้วยกรดซัลฟูริก, สีน้ําเงินเปลี่ยนเป็นสีเหลือง. การมีตัวต่อต้าน HBcAg ในตัวอย่างแสดงด้วยสีต่ํา,หรือไม่มีสีเลย.

ความต้องการตัวอย่าง

1.การเก็บตัวอย่าง:ไม่จําเป็นต้องมีการเตรียมความพร้อมพิเศษของผู้ป่วย การเก็บตัวอย่างตามปฏิบัติการห้องปฏิบัติการปกติ ตัวอย่างเซรม/พลาสมาสดสามารถใช้กับการวัดนี้ได้เลือดที่เก็บโดยการฉีดหลอดเลือด ควรปล่อยให้หลอดเลือดหลอมแบบธรรมชาติและสมบูรณ์แบบ ∙ เซรั่มต้องแยกออกจากหลอดเลือดในระยะเร็วที่สุด เพื่อหลีกเลี่ยงการหลอดเลือดในหลอดเลือดแดงควรระวังให้แน่ใจว่าตัวอย่างเซรม / พลาสมาจะใสและไม่ติดเชื้อด้วยจุลินทรีย์

2.Hตัวอย่างที่มีโรคหลอดเลือดออก, กลาก, หรือโรคหลอดเลือดออก ใช้เพราะมันอาจให้ผลที่ผิดในการทดสอบไม่ให้ความร้อนทําให้ไม่ทํางาน ตัวอย่างราคากลางของตัวอย่างที่มีความติดเชื้อจากจุลินทรีย์ ไม่ควรใช้

3. HBcAb ELISA มีวัตถุประสงค์เพื่อตรวจสอบตัวอย่างเซรม/พลาสมาแต่ละตัวเท่านั้น อย่าใช้วัตถุตรวจสอบตัวอย่างศพ, น้ําลาย, น้ําปัสสาวะ หรือของเหลวร่างกายอื่น ๆ หรือเลือดรวม (ผสม)

4การขนส่งและการเก็บรักษา: เก็บตัวอย่างไว้ที่อุณหภูมิ 2-8 °C ตัวอย่างที่ไม่จําเป็นต้องตรวจสอบภายใน 3 วัน ควรเก็บไว้ที่แช่แข็ง (-20 °C หรือต่ํากว่า) ควรหลีกเลี่ยงวงจรแช่แข็ง-หย่อนหลายครั้งสําหรับการส่ง, ตัวอย่างควรถูกบรรจุและติดป้ายตามกฎหมายท้องถิ่นและสากลที่มีอยู่สําหรับการขนส่งตัวอย่างทางคลินิกและสารธิดาเชื้อโรค

ขั้นตอนการทดสอบ

1ผสมสารปฏิกิริยาทั้งหมดควรปล่อยให้ถึงอุณหภูมิห้อง 15 นาทีก่อนการใช้

2. ลดน้ําผงล้างในอัตราการลด 1: 40 ด้วยน้ําระบายก่อนการใช้

3ตัวอย่างควรสอดคล้องกับจํานวนของไมโครเพลต แต่ละเพลตควรมีคอนโทรลลบ 3 หลุม คอนโทรลบวก 2 หลุม และคอนโทรลว่าง 1 หลุม(หากตรวจพบด้วยการตรวจพบระยะคลื่นสอง, การตั้งค่าไม่มีขุดควบคุมว่างถูกอนุญาต)

หมายเหตุ: ใช้ปลาย pipette การกําจัดแยกสําหรับตัวอย่างแต่ละตัว, การควบคุมลบและบวก เพื่อหลีกเลี่ยงการติดเชื้อข้าม

4. เพิ่มตัวอย่าง 50μL ลงในบ่อที่ตรงกัน (เมื่อชุดนี้ถูกใช้สําหรับการวินิจฉัยทางคลินิก, ตัวอย่างที่จะต้องทดสอบควรถูกละลายด้วยน้ําเกลือปกติใน 1:30 สําหรับการทดสอบ.เมื่อใช้ในการวิจัยโรคระบาด, ตัวอย่างเดิมสามารถตรวจพบได้ ), เพิ่ม 50μL การควบคุมลบและการควบคุมบวกไปยังหลุมควบคุมลบและหลุมควบคุมบวกการเพิ่ม Enzyme Conjugate 50μL (อย่าเพิ่มในหลุมว่าง).

5สั่น 30 วินาทีด้วยเครื่องหมุน (ขั้นตอนนี้สําคัญมาก) อุบที่ 37 °C เป็นเวลา 30 นาที โดยมีผิวแผ่นปิดปิดแผ่น

6. เมื่อสิ้นสุดการหมัก, ถอนและกําจัดฝาจาน. ถอนออก, เพิ่มถุงความสะอาดในแต่ละบ่อ 20 วินาที. ย้ํา 5 ครั้ง. หลังจากรอบล้างสุดท้าย,เปลี่ยนแผ่นไปบนกระดาษสับ หรือผ้าเช็ดที่สะอาด, และแตะมันเพื่อกําจัดส่วนที่เหลือ

7. เติม Substrate A (50μL) และ Substrate B (50μL) (อย่าเพิ่มในบานเปล่า) ผสมให้ละเอียดโดยการสั่น. เติมที่ 37 °C เป็นเวลา 15 นาทีด้วยเยื่อแผ่นปิดปิดแผ่น

8. เพิ่ม 50μL สต็อปโซลูชั่นในแต่ละบ่อน้ํา (อย่าเพิ่มในบ่อน้ําว่าง) ผสมให้ละเอียด โดยการสั่น, อ่านการดูดซึมภายใน 10 นาทีหลังจากหยุดปฏิกิริยาcalibrate เครื่องอ่านแผ่นด้วย Blank ดีและอ่านการดูดซึมที่ 450nm.ถ้าอุปกรณ์กรองสองตัวใช้ กําหนดความยาวคลื่นมาตรฐานที่ 630nm กําหนดไม่มีถังว่างถูกอนุญาตถ้าใช้ความยาวคลื่นสองตัวในการตรวจจับ คํานวณค่าตัดและประเมินผล