BIOVANTION ชุดทดสอบแอนติบอดีต่อต้านไทโรโกลบูลิน Anti Tg Ab ชุดทดสอบ

Anti-Tg ELISA ชุดทดสอบ Thyroglobulin Ab

1. วัตถุประสงค์การใช้งาน

Immunoassay สำหรับการกำหนดปริมาณแอนติบอดีต่อ thyroglobulin ในหลอดทดลอง ในหลอดทดลองของมนุษย์การวัดค่าการต้าน Tg ใช้เพื่อช่วยในการตรวจหาโรคต่อมไทรอยด์ภูมิต้านตนเอง

2. สรุป

Thyroglobulin (Tg) ผลิตในต่อมไทรอยด์และเป็นส่วนประกอบหลักในรูของต่อมไทรอยด์ในการทำงานร่วมกับเอนไซม์ไทรอยด์จำเพาะเปอร์ออกซิเดส (TPO) Tg มีหน้าที่สำคัญในการสร้างไอโอดีนของแอล-ไทโรซีนและในการก่อตัวของฮอร์โมนไทรอยด์ T4 และ T3ทั้ง Tg และ TPO อาจเป็น autoantigenic

ระดับความเข้มข้นของแอนติบอดีในซีรัมที่ต่อต้าน Tg (Tg-autoantibodies) สูงขึ้นจะพบในผู้ที่เป็นโรคไทรอยด์อักเสบจากภูมิต้านทานผิดปกติความเข้มข้นสูงของ anti-Tg ร่วมกับ anti-TPO บ่งชี้ถึงไทรอยด์อักเสบที่แทรกซึมของลิมโฟซิติกเรื้อรัง (โรคของ Hashimoto)ความถี่ของแอนติบอดี thyroglobulin อยู่ที่ประมาณ 70-80% ในผู้ป่วยที่เป็น autoimmune-thyroiditis รวมทั้ง Hashimoto's disease และประมาณ 30% ในผู้ที่เป็นโรค Graves' การทดสอบ anti-Tg มีความสำคัญสำหรับใช้ในการตรวจสอบการเกิดไทรอยด์ของ Hashimoto และ สำหรับการวินิจฉัยแยกโรค (กรณีที่สงสัยว่าเป็นไทรอยด์อักเสบจากภูมิต้านตนเองที่ไม่ทราบสาเหตุโดยมีผลการทดสอบต่อต้าน TPO เป็นลบ โรคเกรฟส์ที่ไม่มีการแทรกซึมของลิมโฟซิติก และเพื่อแยกแยะการรบกวนโดย Tg-autoantibodies ในการทดสอบ Tg)

แม้ว่าความไวของขั้นตอนจะเพิ่มขึ้นโดยการระบุไทรอยด์แอนติบอดีเพิ่มเติมพร้อมกัน (anti-TPO, TSH-receptor-antibodies) ผลลัพธ์ที่เป็นลบไม่ได้ทำให้มีโรคภูมิต้านตนเองได้อย่างชัดเจนระดับของระดับแอนติบอดีไม่สัมพันธ์กับกิจกรรมทางคลินิกของโรคระดับที่เพิ่มสูงขึ้นในตอนแรกอาจกลายเป็นลบได้หากโรคยังคงอยู่เป็นระยะเวลานานหรือถ้า

การให้อภัยเกิดขึ้นหากแอนติบอดีปรากฏขึ้นอีกครั้งหลังจากการให้อภัย การกำเริบของโรคก็มีโอกาสเกิดขึ้น

การตรวจวิเคราะห์ immunosorbent ที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์ใช้แอนติเจนของมนุษย์และแอนติบอดีต่อ IgG ของมนุษย์ในกระต่าย (anti-IgG)

3. วัสดุรีเอเจนต์ที่ให้มา

• ไมโครเพลทเคลือบ 8 x 12 แผ่น 96 หลุมเคลือบด้วยแอนติเจนของมนุษย์ TG

• เครื่องสอบเทียบ 6 ขวด ขวดละ 1 มล. พร้อมใช้งานความเข้มข้น: 0(A), 50(B) ,150(C), 500(D), 1000(E) และ 2000(F) IU/มล.

• เอ็นไซม์คอนจูเกต, 1 ขวด, 11.0 มล. ของ HRP (horseradish peroxidase) แอนติบอดีต่อต้าน IgG ของมนุษย์ที่ติดฉลากกระต่าย (anti-IgG) ในบัฟเฟอร์ Tris-NaCl ที่มี BSA (bovine serum albumin)ประกอบด้วยสารกันบูด ProClin300 0.1%

• เซรั่มเจือจาง: 1 ขวด 11 มล.ที่ประกอบด้วยเกลือบัฟเฟอร์และสีย้อม

• Wash Solution Concentrate, 1 ขวด, 25 มล. (เข้มข้น 40X), น้ำยาล้าง PBS-Tween

• สารตั้งต้น 1 ขวด 11มล. พร้อมใช้งาน (tetramethylbenzidine) TMB

• Stop Solution, 1 vial, 6.0 ml ของกรดซัลฟิวริก 1 โมล/ลิตร

• ไอเอฟยู 1 ฉบับ

• ฝาจาน: 2 ชิ้น.

4. วัสดุที่จำเป็น (แต่ไม่ได้ให้มา)

• เครื่องอ่านไมโครเพลทพร้อมความสามารถในการดูดซับความยาวคลื่น 450nm และ 620nm
• เครื่องซักผ้าไมโครเพลท
• ตู้ฟัก.
• เครื่องเขย่าจาน.
• ไมโครปิเปตและไมโครปิเปตแบบหลายช่องสัญญาณที่ให้ขนาด 50µl ด้วยความแม่นยำที่ดีกว่า 1.5%
• กระดาษดูดซับ
• น้ำกลั่น

5. ขั้นตอนการทดสอบ

• ใช้เฉพาะจำนวนหลุมที่ต้องการและจัดรูปแบบหลุมไมโครเพลทสำหรับเครื่องสอบเทียบและตัวอย่างแต่ละตัวที่จะวิเคราะห์

• เพิ่ม 100 µL ของตัวสอบเทียบในแต่ละหลุม

• เพิ่ม 100 µL ของ Sample Diluent (สีเขียว) ในแต่ละหลุม ยกเว้นหลุม Calibrator

• เติมตัวอย่าง 10 µL ลงในแต่ละหลุมตัวอย่างเจือจาง (หมายเหตุ: รีเอเจนต์ใน Wells จะเปลี่ยนเป็นสีน้ำเงินจากสีเขียว) จากนั้นเขย่า 30 วินาที

• ปิดฝาจานและฟักที่อุณหภูมิ 37 °C เป็นเวลา 30 นาที

• ทิ้งเนื้อหาของไมโครเพลทโดยการแยกส่วนหรือความทะเยอทะยานหากกำลังเท ให้แตะและเช็ดจานให้แห้งด้วยกระดาษซับน้ำ

• เติมน้ำยาล้าง 350 ไมโครลิตร เท (ก๊อกและซับ) หรือสำลักทำซ้ำอีก 4 ครั้ง รวมเป็น 5 ครั้งเมื่อสิ้นสุดการซัก ให้พลิกจานและเคาะน้ำยาล้างที่เหลือลงบนกระดาษซับน้ำ

• เพิ่ม 100 ไมโครลิตรของคอนจูเกตของเอนไซม์

• ปิดฝาจานและฟักที่อุณหภูมิ 37 °C เป็นเวลา 30 นาที

• เติมน้ำยาล้าง 350 ไมโครลิตร เท (ก๊อกและซับ) หรือสำลักทำซ้ำอีก 4 ครั้ง รวมเป็น 5 ครั้งเมื่อสิ้นสุดการซัก ให้พลิกจานและเคาะน้ำยาล้างที่เหลือลงบนกระดาษซับน้ำ

• เพิ่มสารตั้งต้น 100 ไมโครลิตรในแต่ละหลุมปิดฝาและฟักที่อุณหภูมิแวดล้อม (18-25 ℃) ในที่มืดเพื่อทำปฏิกิริยาเป็นเวลา 10 นาทีอย่าเขย่าจานหลังจากเติมสารย่อย

• เติมสารละลายสต็อป 50 µL ลงในแต่ละหลุม

• เขย่าประมาณ 15-20 วินาทีเพื่อผสมของเหลวภายในบ่อสิ่งสำคัญคือต้องตรวจสอบให้แน่ใจว่าสีน้ำเงินเปลี่ยนเป็นสีเหลืองอย่างสมบูรณ์

• อ่านค่าการดูดกลืนแสงของแต่ละหลุมที่ 450 นาโนเมตร (โดยใช้ความยาวคลื่นอ้างอิง 620 ถึง 630 นาโนเมตรเพื่อลดความไม่สมบูรณ์ของหลุม) ในเครื่องอ่านไมโครเพลตควรอ่านผลลัพธ์ภายใน 30 นาทีหลังจากเพิ่มสารละลายหยุด