ISO Thyroxine T4 Elisa Test ฟรี T4 Serum Test 110 นาทีเวลาอ่าน

T4 ไทรอกซิน
REF: DS177703 96 การทดสอบ

1. วัตถุประสงค์การใช้งาน
การทดสอบภูมิคุ้มกันสำหรับการกำหนดปริมาณไทรอกซีนในหลอดทดลองในซีรัมของมนุษย์

2. สรุป
ฮอร์โมนไทรอกซิน (T4) เป็นผลิตภัณฑ์หลักที่ต่อมไทรอยด์หลั่งออกมาและเป็นส่วนประกอบสำคัญของระบบควบคุมต่อมใต้สมองและต่อมใต้สมองส่วนหน้ามันมีฟังก์ชั่นของการเผาผลาญที่มีอิทธิพลต่อ anabolicไทรอกซีนเกิดขึ้นจากปฏิกิริยาคัปปลิ้งจากโมเลกุล DIT สองโมเลกุล (3,5-diiodotyrosine) ในต่อมไทรอยด์มันถูกเก็บไว้กับ thyroglobulin ใน lumina ของต่อมไทรอยด์ฟอลลิเคิลและหลั่งออกมาตามที่ต้องการภายใต้อิทธิพลของ TSH(1, 2) ส่วนหลัก (> 99 %) ของไทรอกซีนทั้งหมด (T4) ในซีรัมมีอยู่ในรูปแบบที่จับกับโปรตีนเนื่องจากความเข้มข้นของโปรตีนขนส่งในซีรัมขึ้นอยู่กับผลกระทบจากภายนอกและภายในร่างกาย จึงต้องคำนึงถึงสถานะของโปรตีนที่จับกับโปรตีนในการประเมินความเข้มข้นของฮอร์โมนไทรอยด์ในซีรัมด้วยหากละเลยสิ่งนี้ การเปลี่ยนแปลงในโปรตีนที่มีผลผูกพัน (เช่น เนื่องจากการเตรียมเอสโตรเจน ระหว่างตั้งครรภ์หรือในที่ที่มีกลุ่มอาการเนฟโฟรติก เป็นต้น) อาจนำไปสู่การประเมินสถานะการเผาผลาญของต่อมไทรอยด์ที่ผิดพลาด(3, 4, 5, 6, 7) การกำหนด T4 สามารถใช้สำหรับการบ่งชี้ต่อไปนี้: การตรวจหาภาวะต่อมไทรอยด์ทำงานเกิน การตรวจหาภาวะไทรอยด์ทำงานต่ำในระดับปฐมภูมิและทุติยภูมิ และการเฝ้าติดตามการบำบัดด้วยการปราบปราม TSH(8)
การทดสอบ T4 ใช้หลักการทดสอบแบบแข่งขันกับแอนติบอดีที่มุ่งต่อต้าน T4 โดยเฉพาะT4 ภายนอกที่ปล่อยออกมาจากการกระทำของกรด 8-anilino-1-naphthalene sulfonic (ANS)

3. วัสดุรีเอเจนต์ที่ให้มา
• ไมโครเพลทเคลือบ 8 x 12 แถบ 96 หลุม เคลือบล่วงหน้าด้วยอนุพันธ์ T4
• เครื่องสอบเทียบ 6 ขวด ขวดละ 1 มล. พร้อมใช้ความเข้มข้น: 0(A), 2.5(B), 5(C), 10(D), 15(E) และ 30(F) ไมโครกรัม/เดซิลิตร
• Enzyme Conjugate, 1 ขวด, 6.0 ml ของ HRP (horseradish peroxidase) ที่ติดฉลาก monoclonal T4 ของเมาส์ในบัฟเฟอร์ Tris-NaCl ที่มี BSA (bovine serum albumin)ประกอบด้วยสารกันบูด ProClin300 0.2%ANS 1.5 มก./มล.
• Substrate, 1 vial, 11ml, พร้อมใช้, (tetramethylbenzidine) TMB.
• Stop Solution, 1 vial, 6.0 ml of 1 mol/l sulfuric acid.
• Wash Solution Concentrate, 1 ขวด, 25 ml (เข้มข้น 40X), PBS-Tween wash solution.
• IFU จำนวน 1 ชุด
• ฝาจาน: 1 ชิ้น.

4. วัสดุที่จำเป็น (แต่ไม่ได้ให้มา)
• เครื่องอ่านไมโครเพลทพร้อมความสามารถในการดูดซับความยาวคลื่น 450nm และ 620nm
• เครื่องซักผ้าไมโครเพลท
• ตู้ฟัก.
• เครื่องปั่นจาน.
• Micropipettes และ micropipettes หลายช่องให้50μlที่มีความแม่นยำดีกว่า 1.5%
• กระดาษดูดซับ
• น้ำกลั่น

กระบวนการทดสอบ

ตรวจสอบให้แน่ใจว่าตัวอย่างของผู้ป่วย เครื่องสอบเทียบ และตัวควบคุมอยู่ที่อุณหภูมิแวดล้อม (18-25 ℃) ก่อนการวัดผสมรีเอเจนต์ทั้งหมดโดยการพลิกกลับเบาๆ ก่อนใช้งาน

• ใช้เฉพาะจำนวนหลุมที่ต้องการและจัดรูปแบบหลุมของไมโครเพลทสำหรับเครื่องสอบเทียบและตัวอย่างแต่ละตัวที่จะวิเคราะห์• เพิ่ม 50 µL ของเครื่องสอบเทียบหรือตัวอย่างในแต่ละหลุม

• เพิ่ม 50 µL ของคอนจูเกตของเอนไซม์ในแต่ละหลุม

• เขย่าไมโครเพลทเบาๆ เป็นเวลา 30 วินาทีเพื่อผสม

• ปิดฝาจานและฟักที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 60 นาที

• ทิ้งเนื้อหาของไมโครเพลทโดยการแยกส่วนหรือความทะเยอทะยานหากกำลังเท ให้แตะและเช็ดจานให้แห้งด้วยกระดาษซับน้ำ

• เติมน้ำยาล้าง 350 ไมโครลิตร เท (ก๊อกและซับ) หรือสำลักทำซ้ำอีก 4 ครั้ง รวมเป็น 5 ครั้งสามารถใช้แหวนรองไมโครเพลทแบบอัตโนมัติได้เมื่อสิ้นสุดการซัก ให้พลิกจานและเคาะน้ำยาล้างที่เหลือลงบนกระดาษซับน้ำ

• เพิ่มสารตั้งต้น 100 ไมโครลิตรในแต่ละหลุม

• ปิดฝาและฟักที่อุณหภูมิแวดล้อม (18-25℃) ในความมืดเพื่อทำปฏิกิริยาเป็นเวลา 20 นาทีอย่าเขย่าจานหลังจากเติมสารย่อย• เติมสารละลายสต็อป 50 ไมโครลิตรต่อหลุม

• เขย่าประมาณ 15-20 วินาที เพื่อผสมของเหลวภายในบ่อสิ่งสำคัญคือต้องตรวจสอบให้แน่ใจว่าสีน้ำเงินเปลี่ยนเป็นสีเหลืองอย่างสมบูรณ์

• อ่านค่าการดูดกลืนแสงของแต่ละหลุมที่ 450 นาโนเมตร (โดยใช้ความยาวคลื่นอ้างอิง 620 ถึง 630 นาโนเมตรเพื่อลดความไม่สมบูรณ์ของหลุม) ในเครื่องอ่านไมโครเพลตควรอ่านผลลัพธ์ภายใน 30 นาทีหลังจากเพิ่มสารละลายหยุด