Thyrotropin TSH ELISA TEST การทดสอบฮอร์โมนกระตุ้นต่อมไทรอยด์

ขายร้อน TSH ELISA TEST KIT
REF: DS177701 96 การทดสอบ

วัตถุประสงค์การใช้งาน
การทดสอบภูมิคุ้มกันสำหรับการกำหนดปริมาณไทโรโทรปินในหลอดทดลองในซีรัมของมนุษย์

1. สรุป

• ฮอร์โมนกระตุ้นต่อมไทรอยด์ (TSH, thyrotropin) เป็นไกลโคโปรตีนที่มีน้ำหนักโมเลกุลประมาณ30000 ดาลตันและประกอบด้วยสองหน่วยย่อย
• การวัดความเข้มข้นของซีรั่มบ่อยครั้ง thyrotropin (TSH) ซึ่งเป็นไกลโคโปรตีนที่มีน้ำหนักโมเลกุล 28,000 ดาลตันและหลั่งจากต่อมใต้สมองส่วนหน้า โดยทั่วไปถือเป็นตัวบ่งชี้ที่ละเอียดอ่อนที่สุดสำหรับการวินิจฉัยภาวะไทรอยด์ทำงานต่ำระดับปฐมภูมิและทุติยภูมิ (1, 2).
• การวัด TSH มีประโยชน์เท่าเทียมกันในการแยกความแตกต่างของภาวะต่อมไทรอยด์ทำงานต่ำ (hypothalamic) จากโรคไทรอยด์ปฐมภูมิการปลดปล่อย TSH จากต่อมใต้สมองนั้นควบคุมโดยปัจจัยการปลดปล่อยไทโรโทรปิน (TRH) ซึ่งถูกหลั่งโดยไฮโปทาลามัส และโดยการกระทำโดยตรงของ T4 และไตรไอโอโดไทโรนีน (T3) ซึ่งเป็นฮอร์โมนไทรอยด์ที่ต่อมใต้สมอง
• การเพิ่มระดับของ T3 และ T4 ช่วยลดการตอบสนองของต่อมใต้สมองต่อผลกระตุ้นของ TRHในภาวะไทรอยด์ทำงานต่ำในระดับทุติยภูมิและระดับอุดมศึกษา ความเข้มข้นของ T4 มักจะต่ำ และระดับ TSH โดยทั่วไปจะต่ำหรือปกติทั้งการขาด TSH ของต่อมใต้สมอง (ภาวะพร่องไทรอยด์รอง) หรือความไม่เพียงพอของการกระตุ้นต่อมใต้สมองโดย TRH (ภาวะไทรอยด์ทำงานต่ำระดับตติยภูมิ) ทำให้เกิดสิ่งนี้
• การทดสอบการกระตุ้น TRH ทำให้เกิดความแตกต่างของเงื่อนไขเหล่านี้ในภาวะไทรอยด์ทำงานต่ำระดับทุติยภูมิ การตอบสนองของ TSH ต่อ TRH จะลดลงในขณะที่การตอบสนองปกติหรือล่าช้าจะได้รับในภาวะไทรอยด์ทำงานต่ำในระดับตติยภูมิ นอกจากนี้ การถือกำเนิดของการทดสอบอิมมูโนเอ็นไซโมเมตริกยังทำให้ห้องปฏิบัติการมีความไวเพียงพอที่จะทำให้เกิดความแตกต่างของภาวะต่อมไทรอยด์ทำงานเกินจากประชากรยูไทรอยด์และขยายประโยชน์ของ การวัด TSHวิธีนี้เป็นการทดสอบรุ่นที่สอง ซึ่งให้วิธีการสำหรับการเลือกปฏิบัติในช่วงไฮเปอร์ไทรอยด์-ยูไทรอยด์(3)

2. วัสดุรีเอเจนต์ที่ให้มา
• ไมโครเพลทเคลือบ 8 x 12 แถบ 96 หลุม เคลือบล่วงหน้าด้วยเมาส์โมโนโคลนอล Anti-TSH
• เครื่องสอบเทียบ 6 ขวด ขวดละ 1 มล. พร้อมใช้ความเข้มข้น: 0(A), 0.5(B), 2(C), 5(D), 10(E) และ 25(F) μIU/มล.
• Enzyme Conjugate, 1 ขวด, 6.0 ml ของ HRP (horseradish peroxidase) ที่ติดฉลาก monoclonal Anti-TSH ของเมาส์ในบัฟเฟอร์ Tris-NaCl ที่มี BSA (bovine serum albumin)ประกอบด้วยสารกันบูด ProClin300 0.1%
• Substrate, 1 vial, 11ml, พร้อมใช้, (tetramethylbenzidine) TMB.
• Stop Solution, 1 vial, 6.0 ml of 1 mol/l sulfuric acid.
• Wash Solution Concentrate, 1 ขวด, 25 ml (เข้มข้น 40X), PBS-Tween wash solution.
• IFU จำนวน 1 ชุด
• ฝาจาน: 1 ชิ้น.

วัสดุที่จำเป็น (แต่ไม่ได้ให้มา)
• เครื่องอ่านไมโครเพลทพร้อมความสามารถในการดูดซับความยาวคลื่น 450nm และ 620nm
• เครื่องซักผ้าไมโครเพลท
• ตู้ฟัก.
• เครื่องปั่นจาน.
• Micropipettes และ micropipettes หลายช่องให้50μlที่มีความแม่นยำดีกว่า 1.5%
• กระดาษดูดซับ
• น้ำกลั่น

3. ขั้นตอนการทดสอบ

ตรวจสอบให้แน่ใจว่าตัวอย่างของผู้ป่วย เครื่องสอบเทียบ และตัวควบคุมอยู่ที่อุณหภูมิแวดล้อม (18-25 ℃) ก่อนการวัดผสมรีเอเจนต์ทั้งหมดโดยการพลิกกลับเบาๆ ก่อนใช้งาน

• ใช้เฉพาะจำนวนหลุมที่ต้องการและจัดรูปแบบหลุมของไมโครเพลทสำหรับเครื่องสอบเทียบและตัวอย่างแต่ละตัวที่จะวิเคราะห์• เพิ่มเครื่องสอบเทียบหรือตัวอย่าง 25 µL ในแต่ละหลุม

• เพิ่ม 100 ไมโครลิตรของคอนจูเกตของเอนไซม์ในแต่ละหลุม

• เขย่าไมโครเพลทเบาๆ เป็นเวลา 30 วินาทีเพื่อผสม

• ปิดฝาจานและฟักที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 60 นาที

• ทิ้งเนื้อหาของไมโครเพลทโดยการแยกส่วนหรือความทะเยอทะยานหากกำลังเท ให้แตะและเช็ดจานให้แห้งด้วยกระดาษซับน้ำ

• เติมน้ำยาล้าง 350 ไมโครลิตร เท (ก๊อกและซับ) หรือสำลักทำซ้ำอีก 4 ครั้ง รวมเป็น 5 ครั้งสามารถใช้แหวนรองไมโครเพลทแบบอัตโนมัติได้เมื่อสิ้นสุดการซัก ให้พลิกจานและเคาะน้ำยาล้างที่เหลือลงบนกระดาษซับน้ำ

• เพิ่มสารตั้งต้น 100 ไมโครลิตรในแต่ละหลุม

• ปิดฝาและฟักที่อุณหภูมิแวดล้อม (18-25℃) ในความมืดเพื่อทำปฏิกิริยาเป็นเวลา 20 นาทีอย่าเขย่าจานหลังจากเติมสารย่อย

• เติมสารละลายสต็อป 50 ไมโครลิตรต่อหลุม

• เขย่าประมาณ 15-20 วินาที เพื่อผสมของเหลวภายในบ่อสิ่งสำคัญคือต้องตรวจสอบให้แน่ใจว่าสีน้ำเงินเปลี่ยนเป็นสีเหลืองอย่างสมบูรณ์

• อ่านค่าการดูดกลืนแสงของแต่ละหลุมที่ 450 นาโนเมตร (โดยใช้ความยาวคลื่นอ้างอิง 620 ถึง 630 นาโนเมตรเพื่อลดความไม่สมบูรณ์ของหลุม) ในเครื่องอ่านไมโครเพลตควรอ่านผลลัพธ์ภายใน 30 นาทีหลังจากเพิ่มสารละลายหยุด