EBV-VCA IgA Ab ทดสอบ ELISA Kit เอนไซม์ Immunoassay ทดสอบพลาสม่าตัวอย่าง

EBV-VCA IgA Ab ELISA Kit หมายเลขแคตตาล็อก: BE501A
เอ็นไซม์อิมมูโนแอสเซย์สำหรับการตรวจหาแอนติบอดี IgA ต่อไวรัสแคปซิดแอนติเจน (VCA) ของ Epstein-Barr Virus (EBV)
 
1. หลักการของการทดสอบ
ชุด EBV-VCA IgA Ab ELISA ใช้ระบบตรวจจับที่หลุมไมโครเพลทเคลือบด้วยแอนติเจนลูกผสมที่สอดคล้องกับส่วนแอนติเจนสูง EBV-VCAตัวอย่างเซรั่มหรือพลาสมา ตัวควบคุมจะถูกเพิ่มลงในบ่อในระหว่างการฟักไข่ แอนติบอดี IgA ที่จำเพาะสำหรับ EBV-VCA ที่มีอยู่ในตัวอย่างจะจับกับแอนติเจนลูกผสมซึ่งจับจ้องอยู่ที่หลุมไมโครเพลทบ่อน้ำถูกล้างเพื่อขจัดวัสดุที่ไม่ถูกผูกไว้ และคอนจูเกตที่ต้าน IgA เปอร์ออกซิเดสของมนุษย์จะจับกับสารเชิงซ้อนของแอนติเจน-แอนติบอดี และคอนจูเกตของเอ็นไซม์ที่ไม่ถูกผูกไว้ส่วนเกินจะถูกลบออกอีกครั้งโดยการล้างสารตั้งต้นของเอนไซม์ เตตระเมทิลเบนซิดีน (TMB) ถูกเติมลงไปเมื่อฟักไข่ สารตั้งต้นจะถูกไฮโดรไลซ์โดยเอนไซม์ที่ถูกผูกไว้ และสีน้ำเงินหรือสีเขียวอมฟ้าจะพัฒนาในหลุมที่มีแอนติบอดี EBV-VCA IgAปฏิกิริยาของเอนไซม์จะหยุดลงโดยการเติมกรดซัลฟิวริกความเข้มของสีที่พัฒนาขึ้นจะอ่านค่าสเปกโตรโฟโตเมตริกที่ 450 นาโนเมตร (450 นาโนเมตร/630 นาโนเมตร) และเป็นสัดส่วนกับปริมาณของแอนติบอดีที่มีอยู่ในตัวอย่าง
รีเอเจนต์
 
2. วัสดุที่มาพร้อมกับชุดอุปกรณ์:

 
3. ขั้นตอนการทดสอบ

1. นำ ELISA Kit (รีเอเจนต์ทั้งหมด) และตัวอย่างไปที่อุณหภูมิห้องก่อนใช้งาน (ประมาณ 30 นาที)
2. น้ำยาล้างบัฟเฟอร์เข้มข้น 1:19 เจือจางด้วย ddH2Oตัวอย่างเช่น น้ำยาล้างบัฟเฟอร์เข้มข้น 5 มล. ควรเจือจางเป็นปริมาตรรวม 100 มล. ด้วยน้ำที่ปราศจากไอออนหรือน้ำกลั่น
3. สำหรับการทดสอบแต่ละครั้ง ให้ตั้งค่าว่างหนึ่งรายการและตัวควบคุมพื้นหลัง ตัวควบคุมเชิงบวกสองรายการและตัวควบคุมเชิงลบสามรายการจ่ายสารควบคุมเชิงบวก 100 มล. และกลุ่มควบคุมเชิงลบที่ซ้ำกันในแต่ละหลุมไม่ควรเพิ่มตัวอย่างหรือ HRP-Conjugate ลงในช่องว่าง
4. จ่ายตัวอย่างเจือจาง 100 มล. ลงในหลุมทดสอบแต่ละหลุม ยกเว้นส่วนควบคุม
5. เพิ่มตัวอย่างทดสอบแต่ละตัวอย่าง 10 มล. ลงในหลุมทดสอบกระแสน้ำวนที่จะผสม
6. ฟักเป็นเวลา 30 นาทีที่ 37°C
7. ล้างแต่ละหลุม 5 ครั้งโดยเติมแต่ละหลุมด้วยบัฟเฟอร์สำหรับล้างที่เจือจาง จากนั้นพลิกจานอย่างแรงเพื่อเอาน้ำออกทั้งหมดและปิดกั้นขอบของบ่อน้ำบนกระดาษดูดซับเป็นเวลาสองสามวินาที
8. เติม Enzyme Conjugate 100 มล. ลงในแต่ละหลุมผสมเบา ๆ โดยหมุนแผ่น microtiter บนแท่นแบนเป็นเวลา 1 นาทีอย่าเพิ่ม Enzyme Conjugate ลงในช่องว่างให้ดี
9. ฟักเป็นเวลา 20 นาทีที่ 37°C
10. ล้างจาน 5 ครั้งตามขั้นตอนที่ 7
11. เติม Substrate Solution A (พื้นผิว HRP) หนึ่งหยด (50 มล.) ในแต่ละหลุม จากนั้นเติม Substrate Solution B (TMB) หนึ่งหยด (50 มล.) ลงในแต่ละหลุมผสมเบา ๆ และฟักที่อุณหภูมิ 37°C เป็นเวลา 30 นาที.
12. เติม Stop Solution หนึ่งหยด (50 มล.) ในแต่ละหลุมเพื่อหยุดปฏิกิริยาของสีอ่านค่า OD ที่ 450 นาโนเมตร/630 นาโนเมตรด้วยเครื่องอ่านแผ่นกรองคู่เป็นตัวเลือกในการอ่านค่า OD ที่ 450 นาโนเมตรด้วยเครื่องอ่านแผ่นกรองเดี่ยว(ใช้ค่า OD ของหลุมว่างเพื่อแก้ไขการอ่านค่า OD ทั้งหมดจากหลุมทั้งหมด)