ชุดทดสอบ TNF-α Elisa ของมนุษย์

การใช้

ชุดนี้ใช้ในการกําหนดปริมาณ TNF-α ในเซลล์มนุษย์

ขั้นตอนการตรวจสอบ

1- ลดน้ําหนักและเพิ่มตัวอย่าง: ลดความหนาแน่นเดิม มาตรฐานตามตารางล่าง 400ng/L 5 Standard 150μl Original density Standard+150μl Standard diluent 200ng/L 4 Standard 150μl 5 Standard+150μl Standard diluent 100ng/L 3 Standard 150μl 4 Standard+150μl Standard diluent 50ng/L 2 Standard 150μl 3 Standard +150μl Standard diluent 25ng/L 1 Standard 150μl 2 Standard +150μl Standard diluent

2.เพิ่มตัวอย่าง: กําหนดตัวอย่างว่างแยกกัน (ตัวอย่างว่างสําหรับการเปรียบเทียบไม่เพิ่มตัวอย่างและ HRP-Conjugate reagent, อื่น ๆ ทุกขั้นตอนการดําเนินงานคือเหมือนกัน)เพิ่ม 50μl ของสแตนดาร์ตไปยัง Microelisa stripplate, เพิ่มตัวอย่างละลาย 40μl ไปยังตัวอย่างการทดสอบ Weil, จากนั้นเพิ่มตัวอย่างการทดสอบ 10μl (ตัวอย่างการละลายสุดท้ายเป็น 5 เท่า), เพิ่มตัวอย่างไปยัง Weil, ไม่แตะต้องผนัง Weil เท่าที่จะเป็นไปได้, และผสมให้ละเอียด.

3.ฝัง: หลังจากปิดจานด้วยเยื่อจานปิดฝัง 30 นาทีที่ 37 °C

4.จัดตั้งของเหลว: 30 (หรือ 20) ครั้งของสารล้างละลาย 30 (หรือ 20) ครั้งของน้ํา distiled และสํารอง

5.ล้าง: เปิดแผ่นปิดผิว, ถอนเหลว, แห้งด้วยการสวิง, เพิ่มผงล้างในแต่ละถัง, เงียบ 30 นาทีแล้วระบายน้ํา, ย้ํา 5 ครั้ง, แห้งด้วยการตี.

6.เพิ่มเติมเอนไซม์:เพิ่มสารปฏิกิริยา HRP-Conjugate 50μl ในแต่ละถัง ยกเว้นถังว่าง

7.อุปกรณ์ปลูก: การดําเนินงานกับ 3.

8การซักผ้า: การดําเนินงานกับ 5

9.color: เพิ่ม Chromogen Solution A 50ul และ Chromogen Solution B 50ul ไปยังกระบอกแต่ละกระบอก, หลีกเลี่ยงการอนุรักษ์แสง 10 นาทีที่ 37 °C

10.หยุดปฏิกิริยา: เพิ่ม Stop Solution50μl ให้กับแต่ละ wel, หยุดปฏิกิริยา ((สีน้ําเงินเปลี่ยนเป็นสีเหลือง)

11.การทดสอบ: คว้าค่าว่างเป็นศูนย์, อ่านการดูดซึมที่ 450nm หลังการเพิ่มสารหยุดและภายใน 15 นาที

ความต้องการตัวอย่าง

1. การสกัดตัวอย่างให้รวดเร็วที่สุดเท่าที่จะเป็นไปได้ และตามหนังสือที่เกี่ยวข้อง และควรทดลองให้รวดเร็วที่สุดเท่าที่จะเป็นไปได้ หลังจากการสกัดตัวอย่างตัวอย่าง 1 ตัวสามารถเก็บรักษาได้ในอุณหภูมิ 20 °C เพื่อรักษาหลีกเลี่ยงวินิจฉัยการแช่แข็ง-ไหลที่ซ้ํา

2ไม่สามารถตรวจพบตัวอย่างที่มี NaN3 เพราะ NaN3 ละเมิด HRP ที่มีผล

หมายเหตุสําคัญ

1. ชุดเอาออกจากสภาพแวดล้อม refrigeration ควรสมดุล 15-30 นาทีในอุณหภูมิห้องพล็อตควรเก็บไว้ในถุงปิด.

2การล้าง buffer will การแยกกระจก, มันสามารถถูกทําความร้อนน้ําช่วยละลายเมื่อละลาย การล้างไม่ได้ส่งผลต่อผล

3. เพิ่มตัวอย่างกับตัวอย่างในแต่ละขั้นตอน, และตรวจสอบความแม่นยําของมันบ่อย ๆ, หลีกเลี่ยงความผิดพลาดการทดลอง. เพิ่มตัวอย่างภายใน 5 นาที, หากจํานวนตัวอย่างมาก, แนะนําการใช้ Voley.

4หากสารทดสอบมีปริมาณสูงเกินไป (OD ของตัวอย่างใหญ่กว่าขนาดมาตรฐานแรก) กรุณาละลายตัวอย่าง (n-fold) กรุณาละลายและคูณด้วยปริมาณละลาย(×n×5).

5. เปลือกแผ่นปิดจํากัดการใช้งานครั้งเดียวเท่านั้น เพื่อหลีกเลี่ยงการติดเชื้อ

6สารสับสราทหลบพ้นการรักษาแสง

7. กรุณาใช้คําแนะนําอย่างเคร่งครัด การกําหนดผลการทดสอบต้องใช้เครื่องอ่านจาน microtiter เป็นมาตรฐาน

8. ตัวอย่าง Al, ล้างพัฟเฟอร์และทุกชนิดของขยะควรตามกระบวนการของสารติดเชื้อ

9. อย่าผสมสารปฏิกิริยากับพวกจากชุดอื่น