แมลงมะเร็งเนคโรซิสปัจจัยอัลฟ่า ELISA Kit

Rat Tumor necrosis factor α,Cachectin,TNF,TNFSF2,TNF-α ELISA KIT

ชุดทดสอบ ELISA สำหรับ Rat Tumor Necrosis Factor Alpha สำหรับ Tnf Alpha 48 หลุม

วัสดุที่ให้มาพร้อมกับชุดทดสอบ

หลักการ

ชุดทดสอบ ELISA นี้ใช้วิธี Sandwich-ELISA แผ่น Microelisa stripplate ที่ให้มาในชุดนี้ได้ถูกเคลือบไว้ล่วงหน้าด้วยแอนติบอดีที่จำเพาะต่อTNF-αสารมาตรฐานหรือตัวอย่างจะถูกเติมลงในหลุม Microelisa stripplate ที่เหมาะสมและรวมเข้ากับแอนติบอดีที่จำเพาะ จากนั้นจะมีการเติมแอนติบอดี Horseradish Peroxidase (HRP) ที่เชื่อมต่อกับTNF-αลงในแต่ละหลุม Microelisa stripplate และบ่ม ส่วนประกอบที่ไม่มีพันธะจะถูกล้างออก สารละลาย TMB substrate จะถูกเติมลงในแต่ละหลุม เฉพาะหลุมที่มี TNF-αและแอนติบอดี thrombomodulin ที่เชื่อมต่อกับ HRP จะปรากฏเป็นสีน้ำเงินและเปลี่ยนเป็นสีเหลืองหลังจากเติมสารละลายหยุดปฏิกิริยา วัดความหนาแน่นแสง (OD) ด้วยสเปกโตรโฟโตเมตริกที่ความยาวคลื่น 450 nm ค่า OD เป็นสัดส่วนโดยตรงกับความเข้มข้นของTNF-αคุณสามารถคำนวณความเข้มข้นของTNF-αในตัวอย่างได้โดยการเปรียบเทียบ OD ของตัวอย่างกับเส้นโค้งมาตรฐาน

หมายเหตุ:

• เก็บชุดทดสอบที่ 4°C เมื่อได้รับ ควรปรับสมดุลชุดทดสอบให้อยู่ที่อุณหภูมิห้องก่อนทำการทดสอบ นำแถบที่ไม่จำเป็นออกจากแผ่นเคลือบแอนติบอดี TNF-α ปิดผนึกอีกครั้งในฟอยล์ซิปล็อคและเก็บไว้ที่ 4°C
• ตะกอนอาจปรากฏในบัฟเฟอร์ล้างเข้มข้น โปรดให้ความร้อนกับบัฟเฟอร์เพื่อละลายตะกอนทั้งหมด ซึ่งจะไม่ส่งผลต่อผลลัพธ์
• ควรใช้ปิเปตที่แม่นยำเพื่อหลีกเลี่ยงข้อผิดพลาดในการทดลอง ควรเติมตัวอย่างลงใน Microplate ภายในเวลาไม่เกิน 5 นาที หากมีตัวอย่างจำนวนมาก ขอแนะนำให้ใช้ปิเปตหลายช่อง
• ควรมีเส้นโค้งมาตรฐานในการทดสอบทุกครั้ง แนะนำให้ทำซ้ำหลุม หากค่า OD ของตัวอย่างมากกว่าหลุมแรกของมาตรฐาน โปรดเจือจางตัวอย่าง (n เท่า) ก่อนทำการทดสอบ เมื่อคำนวณความเข้มข้นของ thrombomodulin ดั้งเดิม โปรดคูณด้วยตัวประกอบการเจือจางทั้งหมด (XnX5)
• เพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนข้าม ตัวปิดผนึก Microplate ใช้สำหรับครั้งเดียวเท่านั้น
• โปรดเก็บ Substrate ให้ห่างจากแสง
• การดำเนินการทั้งหมดควรเป็นไปตามคำแนะนำของผู้ผลิตอย่างเคร่งครัด ผลลัพธ์ที่กำหนดโดย Microtiter Plate Reader
• ตัวอย่างทั้งหมด บัฟเฟอร์ล้าง และของเสียควรได้รับการปฏิบัติเหมือนเป็นสารติดเชื้อ
• ไม่ควรผสมน้ำยาจากหลายชุด

ความเข้มข้นที่ทราบของ TNF-a Standard และค่า OD ที่สอดคล้องกันจะถูกพล็อตบนมาตราส่วนล็อก (แกน x) และมาตราส่วนล็อก (แกน y) ตามลำดับ ความเข้มข้นของ TNF-a ในตัวอย่างจะถูกกำหนดโดยการพล็อต O.D. ของตัวอย่างบนแกน Y ความเข้มข้นดั้งเดิมคำนวณโดยการคูณด้วยตัวประกอบการเจือจาง